Anthelmintic resistance of Haemonchus contortus from sheep flocks in Brazil: concordance of in vivo and in vitro (RESISTA-Test©) methods / Resistência anti-helmíntica de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos no Brasil: concordância de métodos in vivo e in vitro (RESISTA-Test©)

Abstract This study evaluated the resistance status of Haemonchus contortus from sheep flocks in the state of São Paulo, Brazil, through comparison between the fecal egg count reduction test (FECRT) and the larval development test (LDT). For the FECRT, 35 sheep were selected in each of five flocks and divided into groups treated with: benzimidazole, levamisole, ivermectin, monepantel and control. Feces were collected for EPG and fecal cultures. The LDT was performed using thiabendazole (TBZ), levamisole (LEV), ivermectin aglycone (IVM-A) and Zolvix (ZLV). Resistance to all drugs was detected using FECRT in 100% of the flocks, except in relation to ZLV (40% resistant and 20% suspected of resistance). LDT indicated resistance to TBZ and IVM-A in all flocks, to LEV in 80% of flocks and to ZLV in 10%. Total agreement was obtained between the two tests for TBZ and IVM (k = 1.0), while for LEV (k = 0.8) and ZLV (k = 0.9), substantial and almost perfect agreement were obtained, respectively. The concordance between the tests was significant, thus showing that it is possible to use the outcome of the LDT to predict the FECRT, and hence validating the former as a fast diagnostic test for use by sheep farmers in Brazil.

Resumo Este estudo avaliou o status de resistência de Haemonchus contortus em rebanhos ovinos do estado de São Paulo, Brasil, através de um estudo comparativo entre o teste de redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e o teste de desenvolvimento larvar (TDL). Para o TRCOF, 35 ovinos foram selecionados em cada um dos cinco rebanhos e divididos em grupos tratados com: benzimidazol, levamisol, ivermectina, monepantel e controle. Fezes foram coletadas para OPG e coproculturas. O TDL foi realizado com tiabendazol-TBZ, levamisol-LEV, ivermectina aglicona-IVM-A e Zolvix-ZLV. Resistência a todos os fármacos foi detectada por meio do TRCOF em 100% dos rebanhos, exceto para ZLV (40% resistentes e 20% suspeitos de resistência). O LDT indicou resistência ao TBZ e IVM-A em todos os rebanhos; em 80% dos rebanhos ao LEV e 10% ao ZLV. Foi obtida concordância total entre os dois testes para TBZ e IVM (k = 1,0), enquanto para LEV (k = 0,8) e ZLV (k = 0,9) foram obtidas concordância substancial e quase perfeita, respectivamente. A concordância entre os testes foi significante, sendo possível usar o resultado do LDT para prever o do TRCOF, validando-se o primeiro como um teste diagnóstico rápido para criadores de ovinos no Brasil.

In vivo study of a homeopathic medicine against Rhipicephalus (Boophilus) microplus in dairy cow

ABSTRACT The tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1887) (Acari: Ixodidae) causes large economic losses to cattle breeders and its control is hampered by problems of resistance to the main commercial synthetic acaricides and the risk of residues in animal products. Alternative controls are important for the sustainability of cattle breeding in tropical regions, principally for organic milk production. This study evaluated the efficacy of a homeopathic preparation to control natural tick infestations. The evaluations were conducted with 24 taurine dairy cows during 12 months. The homeopathic medicine (30 CH + Sulfur 30 CH) was administered in a proportion of 1:100 (v/w) in a formulation with sugar, added to 30 kg of mineral salt. This preparation was supplied along with concentrated feed (2 kg/animal/day). The control group received the same feed mixture without the medicine. The groups were kept in separate paddocks. Data were collected on body weight, packed cell volume and number of engorged female ticks on each animal. Temperature, relative humidity and rainfall were recorded. Engorged females were collected from each group for in vitro comparison of reproductive parameters, and semi-engorged ticks for morpho-histological analysis. The mean results of body weight, packed cell volume and tick number were not statistically different between the control and treated groups: 616.5 kg and 618.6 kg; 27.9% and 27.3%; and 12.19 and 13.58 ticks, respectively. In the in vitro analyses, the average weights of the ticks (0.18 and 0.17 g) and eggs (0.07 and 0.06 g), larval hatching rate (70.1 and 76.6%) and reproductive efficiency index (54.3 and 60.6%) of the control and treated groups, respectively, also were not statistically different. Furthermore, no alteration in the ovaries was detected by microscopic analysis. Therefore, the homeopathic medicine was ineffective to control R. (B.) microplus, although the inclusion of agro-ecological practices might enhance its effect of homeopathy in controlling tick infestations.

Relationship between virulence factor genes in coagulase-negative Staphylococcus spp. and failure of antimicrobial treatment of subclinical mastitis in sheep / Relação entre genes de fatores de virulência em Staphylococcus spp. coagulase-negativos e a falha do tratamento antimicrobiano da mastite subclínica ovina

Coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) are the main microorganisms involved in ovine mastitis. Treatment at the end of lactation can contribute towards cure and prevention of subclinical cases during the subsequent lactation. However, virulence factors and resistance mechanisms presented by CNS can decrease cure rates. The aims of the study were to identify the species of CNS in milk of mastitic ewes with and without antimicrobial treatment, and to investigate the presence of genes relating to resistance of β-lactam antimicrobials, formation of biofilms, production of enterotoxins and production of the toxic shock syndrome toxin. Cases of failure in the treatment were related with the presence/absence of the respective genes. Sixty sheep were divided into three groups: G1, without treatment; G2, animals treated via the intramammary route with 100mg of cloxacillin during drying off; and G3, sheep treated via the intramammary route with 50 mg of nanoparticulate cloxacillin. Milk samples were gathered during drying off and 15 and 30 days after the parturition of the subsequent lactation. The analyses to identify the species of CNS were carried out by means of the internal transcribe spacer technique and the investigation of the genes responsible for the virulence factors and resistance to oxacillin was performed using the polymerase chain reaction (PCR) technique. No sample was positive for the mecA gene. The only gene relating to production of enterotoxins was sec. Among the genes relating to production of biofilm, icaD was the only one identified in the three experimental groups. Staphylococcus warneri was the main species of CNS isolated during the pre and post-partum periods of the sheep. The species carrying genes relating to production of enterotoxins and biofilms were present in uncured sheep.(AU)

Staphylococus spp. coagulase-negativos (SCN) estão entre os principais micro-organismos envolvidos na mastite ovina. O tratamento ao final da lactação pode contribuir com a cura e a prevenção de casos subclínicos durante a lactação seguinte. Todavia, fatores de virulência e mecanismos de resistência apresentados por SCN podem reduzir as taxas de cura. Os objetivos desse estudo foram identificar as espécies de SCN no leite de ovelhas com mastite com e sem tratamento antimicrobiano e investigar a presença de genes relacionados com resistência a antibióticos beta lactâmicos, formação de biofilmes, produção de enterotoxinas e produção da toxina da síndrome do choque tóxico. Casos de falhas no tratamento foram relacionados com a presença/ausência dos respectivos genes. Sessenta ovelhas foram divididas em três grupos: G1, sem tratamento; G2, animais tratados via intramamária com 100mg de cloxacilina antes da secagem; e G3, ovelhas tratadas via intramamária com 50 mg de cloxacilina nanoparticulada. Amostras de leite foram obtidas durante a secagem e 15 e 30 dias depois do parto na lactação seguinte. As análises para identificar as espécies de SCN foram conduzidas por meio da técnica de Internal transcribe spacer e a investigação dos genes responsáveis pelos fatores de virulência e resistência à oxacilina foi realizada usando a técnica reação em cadeia da polimerase. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. O único gene relacionado com a produção de enterotoxinas foi o sec. Dentre os genes relacionados com a produção de biofilme, icaD foi o único identificado nos três grupos experimentais. Staphylococcus warneri foi a principal espécie de SCN isolada durante o pré e pós-parto. As espécies que apresentaram genes relacionados com a produção de enterotoxinas e biofilmes estavam presentes nas ovelhas não curadas.(AU)

Linfadenite granulomatosa em suínos: linfonodos afetados e diagnóstico patológico da infecção causada por agentes do Complexo Mycobacterium avium / Granulomatous lymphadenitis in swine: lymph nodes affected and pathologic diagnosis of the infection caused by Mycobacterium avium Complex agents

Realizou-se um estudo com o objetivo de avaliar a distribuição de lesões granulomatosas nos linfonodos das carcaças de suínos abatidos e de comparar os métodos de isolamento do Complexo Mycobacterium avium (MAC), coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), exames histopatológico e de imunohisto-química (IHQ) para o diagnóstico da linfadenite granulomatosa causada por micobactérias do MAC. Foram utilizadas 431 amostras de linfonodos colhidos de 394 carcaças de suínos abatidos em 12 frigoríficos da Região Sul do Brasil, com o Serviço de Inspeção Federal (SIF). Os linfonodos que apresentavam lesões granulomatosas foram submetidos aos exames histológicos, ZN e IHQ com anticorpo monoclonal produzido com extrato celular de M. avium. A concordância entre os exames foi medida pelo teste Kappa, com nível de confiança de 95 por cento. O exame macroscópico realizado pelo SIF identifica corretamente 90,3 por cento das lesões granulomatosas, quando comparado com o exame histológico e a maioria das carcaças (92,5) apresentam lesões apenas nos linfonodos cadeia alimentar. O exame histológico confirmou a presença de lesões granulo-matosas em 90,3 por cento dos linfonodos. As concordâncias entre os exames histopatológico e coloração de ZN (Kappa: 0,342) e de IHQ e o isolamento do MAC (Kappa: 0,102) foram baixas, porém alta entre os exames de IHQ e histológico com a presença de granulomas típicos nos linfonodos (Kappa: 0,973). O exame de IHQ associado ao exame histopatológico mostrou-se eficiente na identificação das lesões de linfadenite granulomatosa causadas pelo MAC.

A study to evaluate the distribution of granulomatous lesions in the lymph nodes of swine carcasses was accomplished. The main objective was to compare the methods of isolation of mycobacteria of the Mycobacterium avium Complex (MAC), Ziehl-Neelsen (ZN) staining, histopathological examination and immunohistochemistry (IHC) for the diagnosis of granulomatous lymphadenitis caused by MAC. A total of 431 samples of lymph nodes from 394 swine carcasses kept in 12 cold storage rooms of southern Brazil, which had the Service of Federal Inspection (SFI), were analyzed. Lymph nodes with granulomatous lesions were submitted to histological examination, ZN staining and IHC with monoclonal antibody produced with cellular extract of M. avium. The agreement between the exams was measured by the Kappa test at a 95 percent confidence level. The macrocospic examination done by SFI correctly identified 90.3 percent of granulomatous lesions, when compared with histological examination, and the majority of carcasses (92.5 percent) showed the lesions only in lymph nodes of the alimentary chain. Histological examination confirmed the presence of granulomatous lesions in 90.3 percent of the lymph nodes. The agreements between histological examination, ZN staining (Kappa: 0.342), IHC and the isolation of MAC (Kappa: 0.102) were low, however high between IHC and histology with typical presence of granulomas in the lymph nodes (Kappa: 0.973). IHC together with histological examination revealed to be efficient for identification of the granulomatous lymphadenitis caused by MAC.

Artificial infestation of Boophilus microplus in beef cattle heifers of four genetic groups

Resistance of beef cattle heifers to the cattle tick Boophilus microplus was evaluated by artificial infestation of 66 beef cattle heifers of the following genetic groups: 16 Nelore (NE), 18 Canchim x Nelore (CN), 16 Angus x Nelore (AN) and 16 Simmental x Nelore (SN). The animals, with a mean age of 16.5 months, were maintained with no chemical tick control in a Brachiaria decumbens pasture. Four artificial infestations with 20,000 B. microplus larvae were carried out 14 days apart and from day 18 to day 22 of each infestation the number of engorged female ticks (> 4.5 mm) was counted on the left side of each heifer. Data were analyzed as the percentage of return (PR = percentage of ticks counted relative to the number infested), transformed to (PR)», and as log10 (Cij + 1), in which Cij is the number of ticks in each infestation, using the least squares method with a model that included the effects of genetic group (GG), animal within GG (error a), infestation number (I), GG x I and the residual (error b). Results indicated a significant GG x I interaction, because AN and SN heifers had a higher percentage of return than CN and NE heifers, while CN heifers showed a higher percentage of return than the NE heifers only in infestations 3 and 4. Transformed percentages of return were NE = 0.35 ± 0.06, AN = 0.89 ± 0.06, CN = 0.54 ± 0.05 and SN = 0.85 ± 0.06.

Histopatologia em pulmões e corações de frangos suplementados com oxigênio durante a fase de incubação / Histopathology of broiler chicken lungs and hearts supplemented with oxygen during the hatchery period

Analisou-se histopatologicamente, o efeito da suplementação de dois por cento (2 por cento) de oxigênio nas máquinas de incubação, durante o período embrionário, sobre corações e pulmões de aves no primeiro e no 40º dia de vida. A descrição das alterações histológicas dos órgãos revelou que as aves que receberam a suplementação apresentaram menores graus de lesões nos tecidos estudados e redução da taxa de mortalidade dos frangos.

Fatores de risco associados à ocorrência de linfadenite em suínos na fase de crescimento-terminação / Risk factors at the growth-termination phase associated with the occurrence of lymphadenitis in swine

Realizou-se estudo epidemiológico em 60 unidades de terminação de suínos (UT), pertencentes a produtores integrados às principais agroindústrias dos Estados de Santa Catarina e Rio Grande do Sul. Esses produtores foram selecionados em função da ocorrência de linfadenite em lotes de suínos abatidos. O tamanho dos lotes acompanhados em cada UT variou de 22 a 960 suínos. Os animais foram considerados positivos ou negativos para linfadenite, pela avaliação de rotina do Serviço de Inspeção Federal (SIF) no abate. Para coleta dos dados nas UT, foi aplicado um questionário com 156 variáveis em uma única visita às granjas. Nos lotes das 60 UT estudadas, a percentagem de animais positivos para linfadenite foi de 10,37 por cento. Do conjunto de variáveis analisadas foram identificados nove fatores de risco (variáveis explicativas) associados à ocorrência de linfadenite (variável objetiva), os quais são: a má higiene dos comedouros e bebedouros, a água não tratada, a má conservação das instalações, o transporte de ração e animais com o mesmo caminhão, a produção de ração na propriedade, o acesso de outros animais à fabrica de ração, a estocagem de ração pronta em caixas ou sacos e o manejo na produção de animais em sistema contínuo.

Fatores de risco associados à ocorrência de sarna sarcóptica e prevalência em suínos nas fases de crescimento e terminação, na região Sul do Brasil / Risk factors associated with mange ocurrence and prevalence in pigs during the growing and finishing phases, in the South region of Brazil

Foi realizada uma pesquisa epidemiológica observacional em 64 rebanhos da regiäo Sul do Brasil, com o objetivo de determinar a prevalência e identificar o conjunto de fatores de risco que melhor explicam a ocorrência de sarna sarcóptica em suínos nas fase de crescimento e terminaçäo. Foi aplicado um protocolo abrangendo variáveis do ecossistema de suínos em criaçäo intensiva e os dados foram analisados por análise de correspondência múltipla identificando-se dez variáveis associadas à ocorrência de sarna: área menor que 0,85m²/suíno; volume de ar menor que 3,0m³/animal, manejo da instalaçäo no sistema contínuo; umidade relativa do ar menor de 60 por cento ou maior de 70 por cento; uso de raçäo farelada e fornecida à vontade; uso de raçäo com composiçäo fora das recomendaçöes técnicas; excesso de moscas nas instalaçöes e ocorrência de outras doenças no lote. Estas variáveis säo apresentadas em um mapa permitindo visualizar os fatores associados com rebanhos de baixa, média e alta prevalência de sarna. Dos 3.948 animais examinados na linha de abate, 16,64 por cento apresentaram dermatite papular eritematosa indicativa de sarna sarcóptica

Inibiçäo do crescimento de fungos do grupo Aspergillus flavus pelo extrato da semente de "grapefruit" / Growth inhibition moulds of the group Aspergillus flavus by grapefruit seed extract

Nove isolados e uma amostra padräo de fungos do grupo Aspergillus flavus foram avaliados pela sensibilidade ao extrato da semente de "grapefruit". Os fungos foram submetidos a crescimento em ágar contendo 33,3//de extrato de coco-da-bahia e níveis do antifúngico que variavam logaritmamente desde 80 até 5120 ppm. Todas as amostras foram sensíveis ao antifúngico em comportamento linear nas doses testadas, porém, o extrato comportou-se como fungiostático, sendo as doses calculadas para inibiçäo de 99//do crescimento muito elevadas. No entanto, algumas concentraçöes foram satisfatórias, como 5000 ppm (0,5//), que causaram reduçäo de 80//do crescimento na maioria dos isolados

Sensibilidade a violeta genciana de amostras de fungos do grupo Aspergillus flavus isolados de ingredientes e raçöes avícolas em Santa Catarina / Gentian violet sensitivity of Aspergillus flavus isolated from ingredients and poultry feed in Santa Catarina

Nove amostras de fungos do grupo Aspergillus flavus, isolados de ingredientes e raçöes avícolas em Santa Catarina, foram testadas para sua sensibilidade à violeta genciana. Os fungos foram cultivados em ágar, contendo extrato de côco da Bahia (33,3%) e o antifúngico em níveis de 0,1 até 819,2 ug/ml. Os fungos testados foram acompanhados pela amostra padräo Aspergillus parasiticus NRRL-2999 para a comparaçäo do diâmetro da colônia ao quinto dia de cultivo a 28§C. Todas as amostras apresentaram sensibilidade, porém em graus diferentes. Os níveis calculados de violeta genciana para a inibiçäo de 99% do crescimento das colônias variou de 375,1 até 2236,3 ug/ml